常見的免疫檢測技術(shù)!

(一)皮內(nèi)試驗 (intrader rpmal test,ID) 宿主在病原體刺激后，體內(nèi)產(chǎn)生親細(xì)胞性抗體(IgE和IgG4)。當(dāng)其與相應(yīng)抗原結(jié)合后，肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞脫顆粒，釋放生物活性物質(zhì)，引起注射抗原的局部皮膚出現(xiàn)皮丘及紅暈，以此便可判斷體內(nèi)是否某有種特異性抗體存在。

(二)免疫擴(kuò)散(immunodiffusion)和免疫電泳(immunoelectrophoresis)

1．免疫擴(kuò)散 于一定條件下，抗原與抗體在瓊脂凝膠中相遇，在二者含量比例合適時形成肉眼可見的白色沉淀。本法有兩種類型：①單相免疫擴(kuò)散：將一定量的抗體混入瓊脂凝膠中，使抗原溶液在凝膠中擴(kuò)散而形成沉淀環(huán)，其大小與抗原量成正比；②雙相免疫擴(kuò)散：將抗原與抗體分別置于凝膠板的相對位置，二者可自由擴(kuò)散并在中間形成沉淀線。用雙相免疫擴(kuò)散法既可用已知抗原檢測未知抗體，也可用已知抗體檢測未知抗原。

2．免疫電泳 是將免疫擴(kuò)散與蛋白質(zhì)凝膠電泳相結(jié)合的一項技術(shù)。事先將抗原在凝膠板中電泳，之后在凝膠槽中加入相應(yīng)抗體，抗原和抗體雙相擴(kuò)散后，在比例合適的位置，產(chǎn)生肉眼可見的弧形沉淀線。

(三)間接紅細(xì)胞凝集試驗(indirect haemagglutination test，IHA) 以紅細(xì)胞作為可溶性抗原的載體并使之致敏。致敏的紅細(xì)胞與特異性抗體結(jié)合而產(chǎn)生凝集，抗原與抗體間的特異性反應(yīng)即由此而顯現(xiàn)。常用的紅細(xì)胞為綿羊或O型人紅細(xì)胞。

(四)間接熒光抗體試驗 (indirect fluorescent antibody method，IFA)

vvv 本法用熒光素(異硫氰基熒光素)標(biāo)記第二抗體，可以進(jìn)行多種特異性抗原抗體反應(yīng)，即可檢測抗原又可檢測抗體。本法具有較高的敏感性、特異性和重現(xiàn)性等優(yōu)點，除可用于寄生蟲病的快速診斷，流行病學(xué)調(diào)查和疫情監(jiān)測外，還可用于組織切片中抗原定位以及在細(xì)胞和亞細(xì)胞水平觀察和鑒定抗原、抗體和免疫復(fù)合物。

(五)對流免疫電流試驗 (counter-immunoelectrophoresis，CIE) 對流免疫電泳試驗是以瓊脂或瓊脂糖凝膠為基質(zhì)的一種快速，敏感的電泳技術(shù)。既可用已知抗原檢測抗體，又可用已知抗體檢測抗原。反應(yīng)結(jié)果可信度高，適用范圍廣。以本法為基礎(chǔ)改進(jìn)的技術(shù)有酶標(biāo)記抗原對流免疫電泳(enzyme-linked antigen counterimmunoelectrophoresis,ELACIE )和放射對流免疫電泳自顯影(radio-immuno-counterelectrophoretic autography，RCIEPA)等技術(shù)。二者克服了電泳技術(shù)本身不夠靈敏的弱點。

(六)酶聯(lián)免疫吸附試驗 (enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)

vvv 酶聯(lián)免疫吸附試驗原理是將抗原或抗體與底物(酶)結(jié)合，使其保持免疫反應(yīng)和酶的活性。把標(biāo)記的抗原或抗體與包被于固相載體上的配體結(jié)合，再使之與相應(yīng)的無色底物作用而顯示顏色，根據(jù)顯色深淺程度目測或用酶標(biāo)儀測定OD值判定結(jié)果。

(七)免疫酶染色試驗 (immunoenzyme staining test，IEST) 免疫酶染色試驗以含寄生蟲病原的組織切片、印片或培養(yǎng)物涂片為固相抗原，當(dāng)其與待測標(biāo)本中的特異性抗體結(jié)合后，可再與酶標(biāo)記的第二抗體反應(yīng)形成酶標(biāo)記免疫復(fù)合物，后者可與酶的相應(yīng)底物作用而出現(xiàn)肉眼或光鏡下可見的呈色反應(yīng)。

(八)免疫印跡試驗(immunobloting technique，ELIB) 免疫印跡試驗又稱免疫印漬或western blot，是由十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酸胺凝膠電泳(SDS-PAGE)，電轉(zhuǎn)印及固相酶免疫試驗三項技術(shù)結(jié)合為一體的一種特殊的分析檢測技術(shù)。本法具有高度敏感性和特異性。